D. Yu. Ryazantsev, E. M. Chudinova, L. Yu. Kokaeva, S. N. Elansky, P. N. Balabko, G. L. Belova, S. K. Zavriev
Der phytopathogene Pilz Colletotrichum coccodes verursacht gefährliche Krankheiten bei Kartoffeln und Tomaten, die als Anthracnose- und Knollenschwarzfleck bekannt sind. Aufgrund ihrer morphologischen Eigenschaften sind sie oft schwer von Krankheiten zu unterscheiden, die durch andere Mikroorganismen verursacht werden. Bei grünen Tomatenfrüchten kann die Krankheit asymptomatisch sein und sich nur bei reifen roten Früchten manifestieren. Zur schnellen und genauen Diagnose des Erregers wird ein Echtzeit-PCR-Testsystem angeboten. Um ein Testsystem zu entwickeln, wurde die Nukleotidsequenz des Glycerintriphosphat-Dehydrogenase-Gens von 45 C. coccodes-Stämmen, die aus Kartoffelknollen in verschiedenen Regionen Russlands isoliert wurden, bestimmt.
Basierend auf den erhaltenen Ergebnissen und der Analyse ähnlicher Sequenzen anderer Arten, die in der GenBank-Datenbank verfügbar sind, wurden speziesspezifische Primer und eine Sonde für C. coccodes entworfen. Um die Spezifität des erzeugten Testsystems zu testen, wurde eine PCR mit DNA durchgeführt, die aus Reinkulturen von 15 verschiedenen Arten von parasitären und saprotrophen Pilzen isoliert wurde, die mit Tomaten- und Kartoffelpflanzen assoziiert sind (Fusarium oxysporum, F. verticillium, Phomopsis phaseoli, Alternaria alternata, Helminthosporium solani, Colletotrichum coccodes) Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Helminthosporium solani, Phomopsis phaseoli, Neonectria radicicola, Rhizoctonia solani, Penicillium sp., Cladosporium fulvum, C. cladosporioides). Das Vorhandensein von Colletotrichum coccodes-DNA wurde bei einem Schwellenzyklus von 20–27 bestimmt, während andere Spezies nach 40 Zyklen nachgewiesen wurden oder nicht nachgewiesen wurden. Das Testsystem ermöglicht den zuverlässigen Nachweis von C. coccodes-DNA-Konzentrationen von mehr als 0.01 ng / mm3 im analysierten PCR-Gemisch. Unter Verwendung des entwickelten Testsystems wurde das Vorhandensein von C. coccodes in Tomatenblättern mit Symptomen von Pilzkrankheiten und in Kartoffelknollen ohne äußere Krankheitssymptome untersucht. Blätter mit Symptomen einer Pilzinfektion wurden von zwei verschiedenen Feldern im Krasnodar-Territorium gesammelt, Knollen - von Feldern in den Regionen Kostroma, Moskau, Kaluga, Nischni Nowgorod. Ein Tomatenblatt, das C. coccodes-DNA enthielt, wurde im Krasnodar-Territorium gefunden; Ein signifikantes Vorhandensein von DNA dieses Pathogens wurde in 5 Proben von Knollen nachgewiesen, die in den Regionen Kostroma, Moskau, Kaluga gezüchtet wurden.
Einführung
Pilze der Gattung Colletotrichum sind gefährliche Phytopathogene, die Getreide, Gemüse, Kräuter, mehrjährige Früchte und Beerenpflanzen befallen. Eine der allgegenwärtigen Arten dieser Gattung, Colletotrichum coccodes (Wallr).
Hughes ist der Erreger von Anthracnose und schwarzen Flecken von Kartoffeln und Tomaten und verursacht Krankheiten bei einer Reihe anderer Pflanzen der Familie der Solanaceae, einschließlich. Unkraut (Dillard, 1992). C. coccodes betrifft alle unterirdischen Pflanzenteile, Stammbasen, Blätter und Früchte (Andrivon et al., 1998; Johnson, 1994). Auf der Schale infizierter Kartoffelknollen wird die Entwicklung grauer Flecken mit undeutlich ausgeprägten Rändern beobachtet, auf denen schwarze Sporulationspunkte und Mikrosklerotien deutlich sichtbar sind. Während der Lagerung können sich Geschwüre mit erweichtem Inhalt im Fruchtfleisch der Knollen bilden, d.h. Die Krankheit tritt in die Anthracnose-Phase ein, was jedoch äußerst selten ist.
Gleichzeitig sind die Symptome von Anthracnose (Hautgeschwüre mit kleinen schwarzen Punkten) typisch für Tomatenfrüchte. Auf Blättern erscheinen die Symptome von C. coccodes als dunkelbraune Flecken, die normalerweise von gelbem Gewebe begrenzt werden (Johnson, 1994).
Die Entwicklung eines schwarzen Flecks auf den Knollen beeinträchtigt deren Aussehen, was besonders beim Verkauf von gewaschenen Kartoffeln mit roter Schale ausgeprägt ist. Peeling-Peeling führt zu übermäßiger Verdunstung und erhöhten Lagerverlusten (Hunger und McIntyre, 1979). Schäden an anderen Pflanzenorganen führen zu Ertragsverlusten, die sowohl auf offenem als auch auf geschlossenem Boden festgestellt wurden (Johnson, 1994; Tsror et al., 1999). Durch C. coccodes verursachte Krankheiten sind in fast allen kartoffelproduzierenden Regionen der Welt, einschließlich Russland, verbreitet (Leesa, Hilton, 2003; Belov et al., 2018). Die Bekämpfung dieser Krankheiten ist aufgrund der unzureichenden Wirksamkeit bestehender Fungizide gegen C. coccodes und des Mangels an resistenten Sorten schwierig (Read, Hide, 1995).
Das Inokulum von C. coccodes kann in Samenknollen (Read and Hide, 1988; Johnson et al., 1997) und Tomatensamen (Ben-Daniel et al., 2010) persistieren und lange im Boden auf Pflanzenresten überleben (Dillard, 1990) ; Dillard, Cobb, 1993) und in Unkraut (Raid, Pennypacker, 1987). Die Arbeiten einer Reihe von Autoren (Read, Hide, 1988; Barkdoll, Davis, 1992; Johnson et al., 1997; Dillard, Cobb, 1993) haben gezeigt, dass die Entwicklung der Krankheit bei Kartoffeln und Tomaten weitgehend vom Vorhandensein von Inokulum in Samen und Samen abhängt Boden. Um die Krankheitsverluste zu minimieren, ist es daher erforderlich, die Ausbreitung des Pilzes im Samenmaterial, im Boden, in den zur Lagerung gelegten Pflanzkartoffelknollen und Tomatensamen zu diagnostizieren (einschließlich quantitativer). Die morphologische Diagnostik in Boden- und Pflanzenmaterial kann nur durch das Vorhandensein von Mikrosklerotien durchgeführt werden, die jedoch auch bei anderen Pilzarten vorkommen.
Die Symptome an den Knollen sind dem durch den Pilz Helminthosporium solani verursachten Silberschorf sehr ähnlich. Die Isolierung von Colletotrichum coccodes und Helminthosporium solani in eine Reinkultur ist ziemlich schwierig und dauert aufgrund des langsamen Wachstums auf einem Nährmedium lange. Um Colletotrichum-Coccodes schnell identifizieren zu können, müssen instrumentelle Diagnosemethoden verwendet werden. Die bequemste Methode ist die Polymerasekettenreaktion (PCR) und ihre Modifikation - Echtzeit-PCR. Derzeit wird in Europa und den USA ein von britischen Forschern (Cullen et al., 2002) entwickeltes Testsystem für die ITS1-Region von rDNA verwendet. Seine Verwendung hat gute Ergebnisse bei der Analyse russischer Isolate gezeigt (Belov et al., 2018). C. coccodes ist jedoch sehr variabel und sein Nachweis aus einer einzelnen DNA-Sequenz kann zu falsch negativen Ergebnissen führen. Für eine zuverlässigere Diagnose ist eine Analyse für mehrere speziesspezifische DNA-Sequenzen erforderlich, in Verbindung mit denen wir ein ursprüngliches Testsystem entwickelt haben, mit dem C. coccodes anhand der Sequenz des Glycerinaldehyd-3-phosphat-Dehydrogenase-Gens identifiziert werden können.
Materialen und Methoden
Um die Wirksamkeit und Spezifität der erstellten Testsysteme zu beurteilen, verwendeten wir Reinkulturen von 15 Pilzarten, die von den Autoren aus erkrankten Proben von Tomatenblättern und -früchten, Kartoffelknollen, isoliert wurden (Tabelle 1). Zur Isolierung wurden die Organe von Pflanzen mit Symptomen einer Pilzinfektion entnommen, nicht mehr als ein Organ pro Busch.
Eine Scheibe einer Knolle mit einer Schale, eine Scheibe einer Tomatenfrucht und ein betroffenes Blatt wurden unter ein Binokularmikroskop gestellt, wonach Mycel, Sporen oder ein Stück Gewebe in einer Petrischale mit einer geschärften Präparationsnadel auf ein Agarmedium (Würze-Agar) übertragen wurden. Die Isolate wurden auf Agarschräge in Reagenzgläsern bei 4 ° C gelagert.
Proben von Tomatenblättern mit Symptomen von Pilzkrankheiten, die unmittelbar nach der Entnahme (auf dem Feld) analysiert werden sollten, wurden in 70% igen Ethylalkohol gegeben, in dem sie bis zur DNA-Isolierung gelagert wurden. Kartoffelknollen wurden ins Labor geliefert, von ihnen geschält (2 × 1 cm Stück) und bei –20 ° C eingefroren. Gefroren bis zur DNA-Isolierung gelagert.
Reinkulturen von Pilzen zur DNA-Isolierung wurden in flüssigem Erbsenmedium gezüchtet. Das Myzel des Pilzes wurde aus dem flüssigen Medium entfernt, auf Filterpapier getrocknet, in flüssigem Stickstoff eingefroren, homogenisiert, in CTAB-Puffer inkubiert, mit Chloroform gereinigt, mit einer Mischung aus Isopropanol und 0.5 M Kaliumacetat ausgefällt und zweimal mit 2% igem Alkohol gewaschen. Die resultierende DNA wurde in entionisiertem Wasser gelöst und bei –70 ° C gelagert (Kutuzova et al., 20). Die DNA-Konzentration wurde unter Verwendung eines HS-DNA-Quantifizierungskits für doppelsträngige DNA auf Qubit 2017 (Qiagen, Deutschland) gemessen. Die alkoholisierten und gefrorenen Proben wurden in flüssigem Stickstoff verrieben, dann wurde die DNA-Extraktion wie oben beschrieben durchgeführt (für das Myzel von reinen Pilzkulturen).
Tabelle 1. Herkunft der verwendeten Pilzstämme
Pilzname | Pflanze, Orgel | Ort der Auswahl |
---|---|---|
Colletotrichum coccodes 1, C. coccodes 2, C. coccodes 3, Ilyonectria crassa, Rhizoctonia solani | Kartoffelknolle | Region Kostroma, Kartoffelknollen der 1. Feldgeneration, Sorte Red Scarlett |
Colletotrichum Coccodes 4 | Kartoffelblatt | Rep. Mari El, Yoshkar-Ola |
Helminthosporium solani | Kartoffelknolle | Magadan Region, pos. Zelt, Kartoffelknolle |
Cladosporium fulvum | Tomatenblatt | Region Moskau, großfruchtige Tomate |
Alternariaomatophila | Tomatenfrucht | Übergabe durch die Mitarbeiter des Labors für Mykologie und Phytopathologie des Allrussischen Forschungsinstituts für Pflanzenschutz |
Fusarium verticillium, Phomopsisphaseoli, Alternaria alternata, Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Cladosporium cladosporioides, Acrodontium luzulae, Penicillium sp. | Tomatenfrucht | Krasnodar-Territorium, Bezirk Krymsky, Klasse Creme |
Fusarium oxysporum | Weizenwurzel | Region Moskau. |
Die PCR wurde an einem DTprime-Verstärker (DNA-Technologie) durchgeführt. Für die PCR wurden Originalprimer und eine Sonde für die speziesspezifische Region des Glycerintriphosphatdehydrogenase-Gens verwendet: Vorwärtsprimer Coc70gdf –TCATGATATCATTTCTCTCACGGCA, Rückwärtsprimer Coc280gdr - TACTTGAGCATGTAGGCCTGGGT1. Die Primer amplifizieren eine 213 bp Region.
Die Reaktion dauerte 50 ng Gesamt-DNA (bei der Analyse von Blättern und Knollen) und 10 ng (bei der Analyse von DNA von Reinkulturen von Pilzen). Das Reaktionsgemisch (35 & mgr; l) wurde durch eine Paraffinschicht in zwei Teile getrennt: Der untere (20 & mgr; l) enthielt 2 & mgr; l 10 × Reaktionspuffer (750 mM Tris-HCl, pH 8.8; 200 mM (NH 4) 2 SO 4; 25 mM MgCl 2; 0.1% Tween- 20) 0.5 mM jedes Desoxynukleotidtriphosphats, 7 pmol jedes Primers und 4 pmol einer hydrolysierbaren fluoreszierenden Sonde; Die obere enthielt 1 & mgr; l 10 × PCR-Puffer und 1 U Taq-Polymerase.
Die Trennung der Mischung mit Paraffin ermöglicht es, die Röhrchen für eine lange Zeit bei einer Temperatur von 5 ° C zu lagern und einen Heißstart für die PCR bereitzustellen, nachdem sie 10 Minuten lang auf eine Temperatur über 80 ° C erhitzt wurden. Die PCR wurde gemäß dem folgenden Programm durchgeführt: 94.0 ° C - 90 s (1 Zyklus); 94.0 ° C - 30 s; 64.0 ° C - 15 s (5 Zyklen); 94.0 ° C - 10 s; 64.0 ° C - 15 s (45 Zyklen); 10.0 ° C - Lagerung.
Ergebnisse und Diskussion
Die Glycerintriphosphat-Dehydrogenase-Gensequenzen wurden in 45 Stämmen bestimmt, die aus Blättern, Stielen, Kartoffelknollen und Tomatenfrüchten (Kutuzova, 2018) in verschiedenen Regionen Russlands isoliert wurden. Die untersuchten Sequenzen aller Stämme wurden in zwei Gruppen unterteilt, die sich in zwei Nukleotiden unterschieden. Die Nukleotidsequenzen von Vertretern beider Gruppen unter den Nummern KY2 und KY496634 sind in der GenBank hinterlegt.
Die auf ihrer Basis entworfenen Primer coc70gdf, coc280gdr und die cocgdz-Sonde wurden mit dem BLAST-Programm überprüft (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) zu allen Sequenzen des Glycerintriphosphat-Dehydrogenase-Gens von Arten der Gattung Colletotrichum und anderen in der GenBank-Datenbank verfügbaren Organismen.
Es wurden keine DNA-Regionen anderer Organismen gefunden, die zu Primern und Sonden hoch homolog waren.
Die Empfindlichkeit des Testsystems wurde unter Verwendung von Proben mit unterschiedlichen Konzentrationen von C. coccodes-DNA, DNA eines mit Anthracnose infizierten Kartoffelblatts (2017 in Mari El, Sorte Red Scarlett gesammelt) und von schwarzen Flecken betroffener Knollenschale (gesammelt in der Kostroma-Region) überprüft. Sorte Red Scarlett, Tabelle 2). Um das Vorhandensein von DNA in Knollen und Kartoffelblättern zu bestätigen, wurden C. coccodes-Stämme aus ihnen in Reinkulturen isoliert.
Die Ergebnisse der Sensitivitätsanalyse des Testsystems zeigen, dass es verwendet werden kann, um das Vorhandensein von C. coccodes-DNA in einer Probe erfolgreich zu diagnostizieren, wenn sein Gesamtgehalt im PCR-Gemisch mehr als 0.05 ng beträgt. Dies ist für den Nachweis völlig ausreichend, da eine Sklerotie durchschnittlich 0.131 ng enthält und eine Spore etwa 0.04 ng DNA enthält (Cullen et al., 2002). Das von der englischen Gruppe entwickelte Testsystem (Cullen et al., 2002) zeigte eine ähnliche Empfindlichkeit (Schwellenzyklus 34 bei 0.05 ng DNA und 37 bei 0.005 ng).
Die Analyse von natürlichen Proben, die C. coccodes enthielten, ermöglichte es in allen Fällen, das Vorhandensein in der Probe zuverlässig nachzuweisen (Tabelle 2). Das vorgeschlagene Verfahren zur DNA-Isolierung war auch auf die Analyse natürlicher Pflanzenproben anwendbar.
Tabelle 2. Bestimmung der Empfindlichkeit des vorgeschlagenen Testsystems zur Identifizierung von Colletotrichum-Coccodes für die Echtzeit-PCR
Probe | DNA-Menge in Probe *, ng | Schwellenzyklus | C. Coccodes-Erkennung |
---|---|---|---|
Mycelium Colletotrichum coccodes | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
Knollenschale 1 | 50 | 32 | + |
Knollenschale 2 | 50 | 30 | + |
Knollenschale 3 | 50 | 31.5 | + |
Kartoffelblatt | 50 | 29.5 | + |
Hinweis. * In einer Mischung von PCR-Produkten.
Die Spezifität des Testsystems wurde an DNA-Proben getestet, die aus 15 Pilzarten extrahiert wurden. Alle Pilzstämme wurden von den Autoren aus betroffenen und gesunden Früchten und Blättern von Tomaten, Kartoffelknollen isoliert; Ein Stamm wurde aus Weizenwurzel isoliert (Tabelle 1). Unter den Arten, die von der Oberfläche der Frucht isoliert wurden, gibt es auch Arten, die für Tomaten nicht pathogen sind (zum Beispiel Phellinus ferrugineovelutinus).
Studien haben gezeigt, dass C. coccodes-DNA bei einem Schwellenzyklus von 20–27 nachgewiesen wurde, während andere Pilzarten nach Zyklus 40 nicht nachgewiesen wurden oder ein Signal gaben, was auf einen unspezifischen Rauscheffekt zurückzuführen ist (Tabelle 3).
Tabelle 3. Überprüfung des Testsystems auf verschiedene Pilzarten
Pilzname | Schwellenzyklus |
Colletotrichum-Kokken 1 | 20.9 |
C. Kokodes 2 | 22.6 |
C. Kokodes 3 | 23 |
C. Kokodes 4 | 22 |
Fusarium oxysporum | > 40 |
F. Vertikalillium | > 40 |
Rhizoctonia solani | > 40 |
Phomopsis Phaseoli | > 40 |
Alternaria alternata | > 40 |
A.omatophila | > 40 |
Helminthosporium solani | > 40 |
Phellinus ferrugineovelutinus | > 40 |
Stammphylium vesicarium | > 40 |
Ilyonectria crassa | > 40 |
Cladosporium cladosporioides | > 40 |
C. fulvum | > 40 |
Acrodontium luzulae | > 40 |
Penicillium sp. | > 40 |
Hinweis. * Die DNA-Menge in allen Proben betrug 10 ng.
Das entwickelte Testsystem wurde verwendet, um C. coccodes in Tomatenblattproben mit Symptomen nekrotropher Krankheitserreger und Pflanzkartoffelknollen ohne sichtbare Symptome zu identifizieren. Für die Studie nahmen wir Samenknollen verschiedener Sorten, die in den Regionen Kostroma, Moskau, Kaluga und Nischni Nowgorod angebaut wurden. Das Vorhandensein von C. coccodes-DNA wurde in den Proben als signifikant angesehen, bei deren Analyse der Schwellenzyklus 35 nicht überschritt. Dieser Schwellenwert wurde auf der Grundlage der zuverlässigen Bestimmung von 0.05 ng C. coccodes-DNA (Schwellenzyklus 33.5, Tabelle 2) und der Tatsache ausgewählt, dass Schwellenzyklen über 40 wurde unspezifische DNA einiger anderer Pilzarten diagnostiziert. Mit diesem Ansatz wurde das signifikante Vorhandensein von C. coccodes-DNA in 5 Proben von Knollen nachgewiesen, die in den Regionen Kostroma, Moskau, Kaluga und in einem Tomatenblatt aus dem Yeisk-Distrikt der Region Krasnodar gezüchtet wurden (Tabellen 4, 5).
Tabelle 4. Nachweis von Colletotrichum-Coccodes an Kartoffelknollen *
Probennummer | Vielzahl von Kartoffeln | Ort des Wachstums | C. Coccodes-Erkennung | Schwellenzyklus |
---|---|---|---|---|
1 | Rotes Scharlachrot | Region Kostroma | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | Sante | Region Moskau. | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | Zhukovsky früh | Region Moskau. | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | Molly | Kaluga Region | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | Fantasie | Kaluga Region | - | |
15 | Gala | Region Nischni Nowgorod. | - | |
16 | - |
Hinweis. * Die DNA-Menge in allen Proben betrug 50 ng.
Tabelle 5. Nachweis von Colletotrichum-Coccodes auf Tomatenblättern *
Probennummer | Ort des Wachstums | C. Coccodes-Erkennung | Schwellenzyklus |
---|---|---|---|
1 | Krasnodar-Territorium, Krimbezirk | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | Krasnodar-Territorium, Yeisk-Distrikt | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* Die DNA-Menge in allen Proben betrug 50 ng.
Das von uns entwickelte Testsystem ist dem von britischen Forschern (Cullen et al., 2002) entwickelten in Bezug auf Sensitivität und Spezifität nicht unterlegen und eignet sich für die Analyse von Pflanzenproben. Seine Anwendung zur Analyse von Samenknollen ermöglichte es, C. coccodes-DNA in Knollen ohne äußere Anzeichen einer Schädigung zu identifizieren und die Infektion von Blättern erfolgreich zu analysieren.
Bisher wurde in Russland keine Analyse von Kartoffelknollen auf den Befall von C. coccodes durchgeführt. Unsere erste Studie zeigte, dass von 16 getesteten Samenknollen, die in verschiedenen Regionen der Russischen Föderation gezüchtet wurden, 5 C. coccodes enthalten. Dies zeigt, dass der schwarze Fleck von Kartoffelknollen in Russland eine häufige Kartoffelkrankheit ist und seine Rolle bei der Verringerung des Volumens und der Qualität der Kartoffelernte unterschätzt wird.
Die Analyse von Tomatenblättern ergab ein signifikantes Vorhandensein von C. coccodes-DNA in einem Blatt aus dem Yeisk-Distrikt des Krasnodar-Territoriums. Früher wurden bei der Untersuchung von Tomatenfeldern in Südrussland unter Verwendung des britischen Testsystems (Cullen et al., 2002) Blätter gefunden, die C. coccodes enthielten, und auf einigen Feldern wurde ein hoher Anteil von Blättern gefunden, die mit C. coccodes infiziert waren (Belov et al., 2018). In den Gebieten Krasnodar und Primorsky in der Region Moskau fanden wir Tomatenfrüchte, aus denen wir Reinkulturen von C. coccodes isolieren konnten. Es ist möglich, dass C. coccodes in Russland auf Tomaten viel weiter verbreitet ist als jetzt angenommen, und seine Schädlichkeit wird ebenfalls unterschätzt.
So haben sich bis heute genügend Informationen über die weit verbreitete Verbreitung von C. coccodes auf Kartoffeln und Tomaten angesammelt.
Um die Rolle dieses Pilzes bei der Entwicklung von Kartoffel- und Tomatenkrankheiten besser zu verstehen, ist es notwendig, seine Verbreitung in Russland zu überwachen, die Rolle von Boden- und Sameninfektionen und die Rolle des schwarzen Flecks bei Verlusten während der Lagerung zu untersuchen. Die Verwendung der PCR-Diagnostik kann diese Arbeit erheblich erleichtern, und die gleichzeitige Verwendung beider Testsysteme erhöht die Genauigkeit der Analyse erheblich.
Diese Arbeit wurde durch ein Stipendium der Russischen Wissenschaftsstiftung Nr. 18-76-00009 unterstützt.
Der Artikel wurde in der Zeitschrift "Mycology and Phytopathology" (Band 54, Nr. 1, 2020) veröffentlicht.